Amicon® Ultra 4 mL 超滤管 -离心速度快而保持很高的回收率 4 种不同蛋白在不同截留分子量的 Amicon® Ultra 4mL 超滤管中浓缩(3kDa 细胞色素 C, 10kDa 细胞色素 C,30kDa BSA,100kDa IgG), 测定在离心一定时间后的回收率。数据显 示所有样品在离心 15 分钟左右回收率均 >95%。 为了方便初次使用者选择**合适的超 滤管产品,默克密理博生命科学部网 站上提供选择指引,您需要按照提 示进行选择,**终会选出一款产品。 为每次实验选择**合适的, 您也能快速成为超滤高手!您知道益启生物公司的超滤浓缩管系列都有哪些吗?松江区Merck超滤浓缩管参数
膜的吸附损失 对于浓度很低及珍贵的样品,除了考虑截留效率和操作方便外,额外 要关注的是采用的超滤膜及设备对目标蛋白的潜在非特异性吸附损 失。不同膜材质对生物分子吸附程度不同,默克密理博的 Ultracel® 再 生纤维素膜在各类膜中对生物分子吸附**小,是 Amicon® Ultra 超滤管 等超滤产品成为优先的**技术关键之一。滤膜和装置表面对溶质的 吸附对样品收率会产生直接影响,所以如果希望尽可能提高得率,就 应该考虑采用较小的设备和膜面积。小量的、较为稀释的样品应该选 用膜面积小的装置,同时保证一定的流速。默克密理博设计了一系列 离心式或搅拌式装置,配合不同的膜面积、不同的截留分子量的切向 流系统,支持您获得理想的处理效果。静安区Millipore超滤浓缩管一级代理上海超滤浓缩管供应商。
截留 截留有时也称为排阻。水合程度、离子和空间位置效应会导致分子量相近 的分子表现非常不同的截留状态。许多生物大分子在不同的 pH 或离子强 度改变的情况下倾向于聚集或改变构象,因此其有效大小可能比 “天然” 分子大恨多,从而导致排阻增加。比如,有些蛋白质在某些缓冲液条件下 会发生多聚化,而另一些则发生解聚(如血红素蛋白)成亚基。这使选择 合适截留分子量的膜变得复杂。以默克密理博的经验,我们通常推荐选择 为目的分子大小一半的膜作为尝试的优先,再根据实际情况加以调整。
无血清样品选择 3kDa 孔径是为了尽可能提高外泌体的回收率。 有血清样品选择100kDa/500kDa孔径是为了尽可能去除细胞分泌蛋白以及血清成分中小于外泌体的白蛋白造成的影响。 研究者可根据样品的粘稠程度,以及需要制备的目标外泌体 / 囊泡 / 颗粒的大小分布来选择和优化超滤孔径(3kDa/10kDa/30kDa/50kDa/100kDa),以便达到更好的得率和操作体验。 样品体积大于 30mL 时可以考虑用超滤杯或 Centricon-70 超滤管,请注意搅拌式超滤杯在200mL 以内时吸附损耗可能较离心式超滤管略偏高。如需进一步提高特定外泌体的纯度,可选用包被相应抗体的磁珠进行亲和纯化精制。上海超滤浓缩管销售公司。
脱盐/缓冲液置换并浓缩 5次低速离心,总耗时~35分钟 1. 在上样池中加入0.5 mL TBS-T预湿Amicon® Pro。1,000×g离心1 min。 2. 优化选做:加入1.5 mL用于置换的缓冲液,1,000×g离心1 min。 3. 上样池下端接上Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管(有5种截留分子量规格可选)。 4. 加入1.5 mL样品,4,000×g离心15 min进行浓缩。 5. 加入1.5 mL需要置换的缓冲液,4,000×g离心15 min,换液的同时进行浓缩。 6. 倒转Amicon® Ultra 0.5 mL超滤管,1,000×g离心回收处理好的蛋白。 * 进行较大体积操作时,可以适当延长离心时间,也可参考Amicon® Pro完整操作说明书 查看详细信息。上海超滤浓缩管代理销售哪家比较好?无锡默克4ml超滤浓缩管
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首先,Amicon® Ultra超滤管的蛋白比较低起始浓度为25ug/ml。请确保样本的起始浓度大于这个浓度。其次,如果问题仍然出现,请不要丢弃样本滤过液以便用于分析可能的原因: 1)如果目的样本在滤过液中,那么请排查: a)是否选择了合适截留分子量的超滤管(目的蛋白分子量的1/2或者1/3)? b)使用的离心力是否是在限定范围内?如果使用的是rpm,请换算成相应的g离心力,具体换算方法请垂询。 c)离心机**近是否有校准过? d)是否***尝试这个蛋白?松江区Merck超滤浓缩管参数